ATCC細(xì)胞株在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長，同時也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）。傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。ATCC細(xì)胞株一般使用蛋白水解酶（比如胰蛋白酶）消化貼壁細(xì)胞成單個細(xì)胞，也可加入乙二胺四乙酸（EDTA）提高消化能力，EDTA 是一種二價離子的螯合劑，能抑制細(xì)胞膜上的Ca2+和Mg2+。常用的細(xì)胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA，一般用不含Ca2+和Mg2+的鹽溶液配置，先用胰酶-EDTA 消化液清洗細(xì)胞（5.0 -10.0 ml/75cm），然后棄去消化液，重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(2.0 to 5.0 ml/75 sq. cm flask) ，觀察ATCC細(xì)胞株直到細(xì)胞變圓脫離瓶壁，此過程一般需要5-15分鐘，為了避免細(xì)胞成團(tuán)，消化細(xì)胞的過程中不要拍打細(xì)胞瓶。對于特別難消化的細(xì)胞，可以加入胰酶EDTA 消化液后把細(xì)胞置于37°C 促進(jìn)消化，ATCC細(xì)胞株脫離瓶壁后，立刻加入含有血清的*培養(yǎng)基中止消化，血清中某些蛋白質(zhì)能夠抑制胰酶的活性。一般情況下，離心并不需要。如果細(xì)胞需要無血清或者低血清的培養(yǎng)基，可以以125000g 轉(zhuǎn)速離心5分鐘，然后棄去中止用的培養(yǎng)基，加入適合的新的培養(yǎng)基輕輕混勻細(xì)胞，移入到新的培養(yǎng)瓶。傳代的比例視細(xì)胞類型而定，
ATCC細(xì)胞株一般是1:2-1:20，具體比例可參考說明書。胰蛋白酶會對某些細(xì)胞的細(xì)胞膜產(chǎn)生損傷，對于這種類型的細(xì)胞，可用細(xì)胞刮輕輕刮下細(xì)胞，加入適量的培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻細(xì)胞，然后進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
ATCC細(xì)胞株的污染鑒定、預(yù)防和處理問題。
普通微生物污染：培養(yǎng)基渾濁，高倍鏡觀察有微生物污染；按規(guī)定棄用并全面嚴(yán)格滅菌。
支原體污染：顯微鏡無法觀察，依經(jīng)驗(yàn)表現(xiàn)為細(xì)胞生長緩慢，有細(xì)胞漂浮等等，應(yīng)通過PCR 等方法鑒定，如發(fā)現(xiàn)支原體污染，ATCC細(xì)胞株應(yīng)按規(guī)定棄用，實(shí)驗(yàn)室要及時全面消毒滅菌，防止蔓延。（有些常規(guī)性細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)不受支原體污染影響，可以繼續(xù)使用細(xì)胞傳代，為防污染擴(kuò)大蔓延，可以選擇性的在培養(yǎng)基中加入價的其它種抗生素，并在隔離實(shí)驗(yàn)室操作和獨(dú)立使用一切用具與培養(yǎng)基等）。
了解每株ATCC細(xì)胞株可能產(chǎn)生的生物危害是很難的，但是強(qiáng)烈推薦，所有的人類和其他靈長類生物的細(xì)胞在能否預(yù)防HIV和肝炎病毒的實(shí)驗(yàn)條件下操作，所有的操作必須在垂直層流超凈臺內(nèi)操作（推薦生物安全柜），操作過程中產(chǎn)生的廢液和廢儀器都要經(jīng)過清洗、酸處理等處理后才能丟棄。
