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什么時(shí)候需要穩(wěn)定細(xì)胞株?

更新時(shí)間:2020-03-19      點(diǎn)擊次數(shù):1884
   什么時(shí)候需要穩(wěn)定細(xì)胞株?
  以下實(shí)驗(yàn),構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株而不是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染更能滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)要求:
  1)外源片段在分裂細(xì)胞中長(zhǎng)期(>2周)穩(wěn)定表達(dá)。雖然普通轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)一般只能保證2-4天的轉(zhuǎn)染和表達(dá)效率,但腺病毒載體在多數(shù)分裂細(xì)胞中可以維持2-4周內(nèi)的高轉(zhuǎn)染效率和表達(dá)周期。而非分裂細(xì)胞,可以使用腺相關(guān)病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)外源基因,因?yàn)橄傧嚓P(guān)病毒載體在許多非分裂細(xì)胞中可以保持長(zhǎng)達(dá)1年的高效表達(dá)。
  2)需要構(gòu)建使用誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng),這主要是由于:
  a)過(guò)表達(dá)基因或者干擾目的基因引起細(xì)胞毒性或者抑制細(xì)胞生長(zhǎng)等不利因素;
  b)目的基因的過(guò)表達(dá)或者干擾需要時(shí)空特異性。
  3)希望控制目的基因過(guò)表達(dá)或者干擾的拷貝數(shù),以避免引入人為因素影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確性。構(gòu)建穩(wěn)定株可以幫助篩選拷貝數(shù)適量的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。
  4)部分細(xì)胞種類(lèi),病毒載體亦無(wú)法達(dá)到高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,通過(guò)構(gòu)建穩(wěn)定株,達(dá)到外源片段的高效表達(dá)。
  5)長(zhǎng)期在少數(shù)幾類(lèi)細(xì)胞中研究幾個(gè)基因的功能,通過(guò)構(gòu)建穩(wěn)定株,可以大大降低頻繁轉(zhuǎn)染或者病毒包裝的成本,也極大方便實(shí)驗(yàn)研究。
  6)部分蛋白穩(wěn)定性*,瞬時(shí)RNA干擾因?yàn)樽饔弥芷诙?,只能抑制目的基因的表達(dá),但無(wú)法去除已經(jīng)表達(dá)的目的蛋白,所以需要通過(guò)構(gòu)建穩(wěn)定株實(shí)現(xiàn)更好的基因干擾效果。
  7)需要往動(dòng)物體內(nèi)注射表達(dá)有外源片段的細(xì)胞。需要構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株,以防止注射入動(dòng)物體內(nèi)后,很快外源片段表達(dá)丟失。
  8)細(xì)胞個(gè)體差異(同一類(lèi)細(xì)胞,不同個(gè)體細(xì)胞基因組存在差異)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有干擾,需要構(gòu)建單克隆細(xì)胞株去除干擾。
  9)需要將外源片段插入基因組中,比如基因敲除,基因插入突變篩選等修飾基因組的實(shí)驗(yàn)。
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